一、 准备工作
（一）微柱凝胶试剂卡的准备 ：观察外观 ，如有干胶 、杂质 、气泡不可使用，之后将卡放置
室温（18－25℃）平衡 ，再用专用离心机离心5分钟。
(二) 试剂的制备 ：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）
（三）标本采集 ：采集被检对象静脉血 ，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本 。
（四）红细胞标本的制备 ：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞*终浓度为0.8% 。
（五）血清标本的制备 ：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中 ，10分钟后
离心 ，取上清 ；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中 ，4℃放置12小时 ，或37℃
放置2小时后离心 ，2000rpm ，10分钟，取上清 。该上清不得有絮状物或沉淀 。
（六）热放散：充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀 ，
置于56℃孵育10分钟 ，期间不断摇动，离心3000rpm ，2－3分钟 ，取上清 。即放散液 。
（七）酸放散 ：
1 、取直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性待检血样（或在体外已吸收血清的红细胞） ，离心
尽可能去除血或血浆。
2 、用生理盐水洗涤待检红细胞4次 ，以除去未结合的抗体，留取约1ml的*后一次洗涤液。
3 、配制酸放散液：取4体积的放散液A与1体积的放散液B混合均匀。
4、将1ml待检压积红细胞与1ml酸放散液混合均匀 ，室温孵育1－2分钟。
5、以3000rpm离心1分钟 。
6、立即将酸放散液移到另一支干净试管中，并加入紫红色中和液调颜色至肉色或水粉色
（500ul放散液加入中和液60－80ul） ，此时PH值近中性。以3000rpm离心1－2分钟 ，
取上清即放散液 。
7、放散液与*后一次洗涤液做平行检测 。
8 、用试管法或微柱凝胶抗人球蛋白卡检测 ，出现阴性反应 ，则需要加入人IgG致敏的红细胞
做确认试验 ，以保证抗人球蛋白试剂的有效性 。
二 、 实验步骤
1 、取新生儿的红细胞0.8%悬液50ul分别加入新生儿ABO 、RhD血型检测卡(微柱凝胶)卡
的1－6孔中。
2 、使用专用离心机离心5分钟（900rpm 2分钟 ，1500 rpm 3分钟）。
3、取出 ，判读结果。
4 、新生儿卡Ⅱ1－3孔分别加入50ul新生儿血清 ，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散
液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入**、4孔 ；将B型红细胞悬液50ul分别加入第2、5孔 ；
将O型红细胞悬液50ul分别加入第3 、6孔中。
6 、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟 ，1500 rpm3分钟） ，取出 ，判读
结果 。
结果判定
阳性结果 ：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体
或血细胞被致敏 。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部 ，在凝胶管底部形成红细胞扣。表明血清中无相应抗
原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面 ，为强阳性反应 ；复合物在胶中为弱阳
性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小 ，反应愈弱（2+或1+） 。
直抗试验以出现凝集为阳性 ，游离和放散试验均以检出可以和新生儿红细胞反应的抗体
为阳性。
三 、注意事项
1 、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做
本实验 。如不得不用过夜血或陈旧血 ，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标
本是否可以做本实验 。
2 、血清标本 ：血清标本必须充分去除纤维蛋白 ，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出 ，阻
碍红细胞沉淀 ，呈假阳性反应 。
3 、如在微柱凝胶中出现溶血现象 ，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因
所致溶血 ，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论 。
4、父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替 。
5、洗出尽量多红细胞进行放散 ；注意放散的温度不可超过56℃ ，以防溶血；天冷时放散液
注意保温 ；吸出尽可能多的放散液 ；注意除去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要
充分洗涤，至少三次 。
6、每日试验前 ，先取出微柱凝胶卡放置至室温 。
7、试剂卡应放在18-25℃储存 ，如若长期放在4℃冰箱 ，建议每1-2个月取出，用专用离心
机离心一次 ，以防止干胶或产生气泡 。
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